BOB半岛(中国)

根据基因序列设计合成sgRNA，针对Knockin插入点或点突变位置构建含Knockin片段或点突变的同源序列，与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞质，Cas9核酸酶、sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA，以含Knockin的同源序列为模版修复基因组DNA，最终取得在目的DNA序列插入Knockin片段或点突变的Knockin小鼠。

CRISPR/Cas9靶向基因改造（敲除、敲入）技术是最新开展起来的一种强有力的基因组编辑工具。CRISPR技术的效率相较于TALEN技术要高得多，且可以一次性的对多个基因同时进行敲除和/或敲入。现已广泛用于各类动植物个体或细胞基因组的遗传学改造。

BOB半岛(中国)生物拥有SPF级动物动物房，配有IVC和EVC饲养设备，新推出小鼠代繁殖、动物保种、饲养与筛选等服务。

顺利获得CRISPR /Cas9基因敲除技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，取得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型 。

条件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系统实现。第一时间把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端，以制备出有两个Loxp位点的floxed小鼠。floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该基因正常表达；当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。